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實驗 7 聚丙烯酰胺凝膠電泳 原理 一 聚丙烯酰胺凝膠電泳（ polyacrylamide gel electrophoresis, 簡稱 PAGE），由稱盤狀電泳。 這種電泳是在區帶電泳的基礎上， 以孔徑大小不同的聚丙烯酰胺凝膠作為支持物， 采用電泳 基質的不連續體系（即凝膠層的不連續性、緩沖液離子成分的不連續性、 pH 的不連續性及 電位梯度的不連續性） ，使樣品在不連續的兩相間積聚濃縮成很薄的起始區帶（厚度為 10-2cm），然后再進行電泳分離。 圓盤電泳名稱來源即由于此法的原理是依靠基質的不連續性（ discontinuity ），湊巧在垂 直柱形凝膠上分散出的區帶也很象圓盤狀（ discoid shape），取“不連續性”和“圓盤狀”的 英文字頭“ disc”。因此英文名稱為“ disc electrophoresis”，中文直譯為盤狀電泳。 儀器裝置：如 圖 A 所示，上下兩個
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背景:實驗表明,軟骨細胞在體外培養時,經常發生表型的丟失。但形成軟骨細胞團塊時可以維持軟骨細胞表型,由此人們探討無支架結構培養組織工程軟骨的技術。目的:擬建立軟骨細胞聚集培養體系,觀察在瓊脂糖表面培養軟骨細胞,無支架條件下構建組織工程軟骨的特點。設計、時間及地點:單一樣本觀察,于2006-10/2007-04在解放軍南京軍區總醫院骨科研究所完成。材料:SPF級新西蘭白兔4只,2周齡,雌雄不限。方法:分離、提取兔關節軟骨原代軟骨細胞,將低熔點瓊脂糖鋪于24孔培養板表面,按每孔2.5×105接種提取的兔原代軟骨細胞,在培養箱內培養,定期換液。主要觀察指標:取10d標本行組織學、Ⅱ型膠原免疫組織化學檢測。結果:10d時,軟骨細胞自聚集形成有一定形狀、大小的類軟骨組織,蘇木精-伊紅染色可見軟骨陷窩結構,甲苯胺藍染色見紫紅色異染,說明有蛋白聚糖的分泌。鈣染色未見鈣化,Ⅱ型膠原免疫組織化學染色有棕黃色顆粒,說明有Ⅱ型膠原分泌。結論:在瓊脂糖表面構建組織工程軟骨的培養體系,瓊脂糖膜阻止軟骨細胞的黏附和伸展,從而保持軟骨細胞的圓形形態;軟骨細胞在瓊脂糖表面直接接觸,加強了細胞之間的信息交流,有利于維持細胞的表型,維持軟骨細胞分泌細胞外基質的特征。
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