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以選育的獲得產(chǎn)L-亮氨酸的谷氨酸棒桿菌MD106為出發(fā)菌株,通過重疊延伸PCR及自殺載體介導(dǎo)的同源重組技術(shù)構(gòu)建panBC及alaT雙基因缺失的突變株MD106ΔpanBC/ΔalaT,并對出發(fā)菌及雙缺失重組菌進(jìn)行搖瓶發(fā)酵試驗(yàn),測定發(fā)酵指數(shù)。結(jié)果顯示,發(fā)酵40h后,突變株的L-亮氨酸的產(chǎn)量為7.91g/L,比出發(fā)菌株提高43.3%,而且主要雜酸——丙氨酸減少超過80%,總雜酸比例較出發(fā)菌株減少55.6%。
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以L-酪氨酸和乙酰氯為主要原料合成了N-乙酰-L-酪氨酸,再和甲醇與氯化亞砜反應(yīng)得到的氯化亞硫酸甲酯反應(yīng)得到N-乙酰-L-酪氨酸甲酯,產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)紅外光譜(IR)和1H NMR化學(xué)位移確證。通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)結(jié)果表明,N-乙酰-L-酪氨酸甲酯合成的最佳工藝條件為物料摩爾比mol(L-酪氨酸)∶mol(氯化亞砜)∶mol(甲醇)=1∶1.3∶10,加熱溫度65℃,加熱時(shí)間2 h。該工藝具有原料價(jià)廉易得、反應(yīng)周期短及產(chǎn)物易分離的特點(diǎn),適于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。
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