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建立蕃茄、涼茶、豬肉、牛奶和植物油中雙酚A縮水甘油醚(BADGE)和酚醛清漆甘油醚(NOGE)系列化合物及其氫氧化和氯化衍生物的高效液相色譜—串聯質譜測定方法。蕃茄和涼茶樣品用乙酸乙酯和正己烷(4∶1)提取;豬肉和牛奶樣品先用乙腈提取,再經低溫過濾脫脂;植物油樣品用甲醇提取,再經低溫過濾脫脂。在正離子模式下以電噴霧電離—串聯質譜儀進行測定。在20,50,100μg/kg 3個濃度水平進行添加-回收率試驗,平均回收率為63.6%～120%。該方法準確、高效,適合食品中BADGE和NOGE系列化合物的測定。
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甘油是生物柴油的副產物,因其價格低廉和高還原性,成為生物發酵的重要碳源.為了進一步提高工程菌對甘油的利用能力,從而提高萜類化合物的合成能力,本研究從β-胡蘿卜素高產菌CAR015出發,對其甘油代謝途徑的多個基因進行了調控.首先敲除了編碼3-磷酸甘油抑制子的glpR基因,然后分別用M1-37、M1-46和M1-93三個不同強度的人工調控元件對glpFK,glpD和tpiA三組基因進行單基因調控和多基因組合調控.研究發現用M 1-46調控glpD基因后p-胡蘿卜素產量達到了64.82 mg/L,是CAR015的4.86倍,甘油消耗速率也提高了100％;調控tpipA基因后β-胡蘿卜素產量略有提高;調控glpFK基因后p-胡蘿卜素產量略有降低.說明G1pD是甘油代謝途徑中的關鍵限速步驟.Q-PCR結果表明,降低甘油代謝途徑的glpD和glpFK基因轉錄水平,增加tpiA基因轉錄水平,可以增加細胞生長速度、提高β-胡蘿卜素產量,可能是因為減少了丙酮醛毒性所致.組合調控glpD和tpiA基因,獲得β-胡蘿卜素產量最高菌株Gly003,其p-胡蘿卜素產量達72.45 mg/L,產率達18.65 mg/g每克干細胞,分別是出發菌株CAR015的5.23倍和1.99倍.總之,GlpD是甘油代謝途徑中的關鍵限速步驟,適當強度調控glpD,可以有效提高重組大腸桿菌的p-胡蘿卜素產量.
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