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目的:對垂絲海棠花和葉α-葡萄糖苷酶抑制活性進(jìn)行研究。方法:利用體外α-葡萄糖苷酶抑制模型,以阿卡波糖為陽性對照對α-葡萄糖苷酶抑制活性評價。結(jié)果:垂絲海棠花和葉的不同提取部位均具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性,垂絲海棠葉70%乙醇部位(IC50=69.68 mg·L-1)的α-葡萄糖苷酶的抑制活性最好,遠(yuǎn)高于陽性對照阿卡波糖(IC50=1 213.38 mg·L-1)。垂絲海棠葉中70%乙醇部位、石油醚部位和乙酸乙酯部位活性均高于垂絲海棠花中相應(yīng)部位,而葉中正丁醇部位略低于花的正丁醇部位,且都高于陽性對照阿卡波糖。此外,各部位的抑制活性均與質(zhì)量濃度呈現(xiàn)相關(guān)性,具有一定的濃度依賴性。結(jié)論:垂絲海棠花和葉不同提取部位均具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性,但不同提取部位其抑制活性有差別。
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【目的】篩選鑒定1株產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的菌株,克隆、表達(dá)該菌株中的β-葡萄糖苷酶基因,研究重組酶的酶學(xué)性質(zhì)并進(jìn)行分子改造。【方法】在自然界中采集土樣,篩選到1株具有β-葡萄糖苷酶活性的菌株,對野生菌進(jìn)行16S rDNA鑒定,比對分析Gen Bank數(shù)據(jù)庫中與野生菌同屬的β-葡萄糖苷酶基因序列,設(shè)計簡并引物PCR擴(kuò)增基因保守區(qū);設(shè)計引物擴(kuò)增目的基因,以pQE30為表達(dá)載體構(gòu)建重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá);采用鎳親和層析對重組酶進(jìn)行純化,研究其酶學(xué)性質(zhì);采用易錯PCR和定點隨機(jī)突變相結(jié)合的方法對野生型β-葡萄糖苷酶進(jìn)行分子改造。【結(jié)果】一個來自于差異檸檬酸桿菌GXW-1的β-葡萄糖苷酶基因被克隆并在大腸桿菌中表達(dá)。酶學(xué)性質(zhì)研究結(jié)果表明該β-葡萄糖苷酶CBGL的最適溫度為45°C,最適p H為6.0,V_(max)值是(0.1704±0.0073)μmol/(mg·min),K_(cat)值為(0.2380±0.0102)/s。CBGL能水解α-pNPG、甜菊苷、黃豆苷和染料木苷。對野生酶進(jìn)行分子改造,獲得V_(max)是野生酶2.54倍的突變體W147F。【結(jié)論】CBGL不僅具有β-1,4-糖苷鍵水解能力,還可能具有一定的α-糖苷鍵水解酶活性。此外,CBGL還能夠水解天然底物甜菊苷、黃豆苷和染料木苷。這些特性表明該β-葡萄糖苷酶在理論研究及在工業(yè)中有一定的應(yīng)用價值。
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