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目的:建立4-甲基-3-硝基苯甲酸(4-methyl-3-nitro-benzoic acid,MNBA)的HPLC測定方法,進行藥動學研究。方法:用乙腈直接沉淀蛋白提取樣品;采用Intertex C18色譜柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以磷酸溶液(p H 0.3)-乙腈(50∶50)為流動相,流速1.0 m L·min-1,檢測波長230 nm;25℃條件下對流動相、血清樣品預處理方法進行篩選,并對該方法進行方法學驗證。結果:待測物質分離度良好,質量濃度在測定范圍內與峰面積線性關系良好(r2≥0.999 9),方法精密(日內、日間精密度均≤5%)且準確(低、中、高3種質量濃度的準確度均在95%~110%之間),低、中、高3種質量濃度的樣品在4℃冰箱保存10 d,-20℃保存20 d及反復凍融3次后均保持穩定無降解。小鼠腹腔注射MNBA后在體內的代謝過程符合開放一房室模型(w=1/c),其藥代動力學參數為:T1/2分別為(17.0±3.2)h、(30.5±2.7)h和(80.7±2.0)h;AUC(0-t)分別為(7 801.8±2 360.7)mg·L-1·min-1、(16 589.1±5 383.6)mg·L-1·min-1和(56 898.9±12 153.5)mg·L-1·min-1。結論:經方法學驗證,本法可作為檢測MNBA的測定方法;本文測定的腹腔注射MNBA在小鼠體內的藥動學過程為MNBA的后續研究提供參考。