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本文建立了適合中國菊花種質資源長期保存的玻璃化超低溫保存技術體系。在4℃下,把1~2mm的菊花莖尖放在含0.4mol/L蔗糖的MS培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)2~3d,用預處理液在25℃下處理30min,再用玻璃化試劑PVS2在冰浴條件下處理15min,換新鮮的PVS2試劑并迅速投入液氮。液氮保存24h后,40℃水浴解凍2min,用含蔗糖1.2mol/L的MS液體培養(yǎng)基洗滌20min,濾紙吸干后接種到恢復培養(yǎng)基中,在25℃條件下弱光培養(yǎng)1~3d轉入正常光照培養(yǎng)條件下培養(yǎng),2周后成活率可達86%以上,成活的莖尖均可再生。
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