應用PCR擴增GRG受體基因第二外顯子的實驗條件研究
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為了研究PCR擴增的最適條件,以GRG受體第二外顯子基因為對象,觀察了影響PCR反應的因素.研究結果表明:最佳變性溫度為92℃與94℃;最適的退火溫度為58℃;最適的引物濃度為0.6,0.8μmol;以1.0U酶量結果最滿意,最適dNTP濃度為100~150μmol/L,最適的鎂離子濃度為2.0mmol/L;最佳循環次數為35個循環;該文可為希望引入PCR作為診斷實驗的實驗室提供有用的信息.
應用3’RACE技術擴增仿刺參C型凝集素基因及實驗條件的優化
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從GenBank上調取刺參C型凝集素(C-type Lectin)基因序列EST,根據此序列設計RACE引物,采用PCR擴增技術得到了仿刺參C-type Lectin基因序列(EST),根據這段EST序列設計1個基因特異引物(GSPF),與通用引物(UPM)擴增,成功地克隆到了該基因的3’末端序列.同時,對仿刺參C型凝集素基因3’克隆的實驗條件進行了優化.該擴增片段長度為670bp,與已知序列重疊部分為417bp.經測序和比對發現該段序列與預期的目標基因的序列一致.
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