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以生姜的脫病毒試管苗在繁殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)25d獲得的叢生芽為試材,探討生姜超低溫玻璃化法保存的最優(yōu)程序。結(jié)果表明:采用繼代培養(yǎng)45d的叢生芽,切取2~3mm,于0.5mol/L蔗糖濃度的MS培養(yǎng)基內(nèi)預(yù)培養(yǎng)2d,60%PVS2室溫處理5min,100%PVS2 0℃下處理30min,迅速投入液氮,48h后,37~40℃水浴快速化凍2min,1.2mol/L蔗糖的MS培養(yǎng)液洗滌20min,在MS+0.5mg/L BA+0.1mg/L NAA+0.3mg/L GA3+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂的培養(yǎng)基上恢復(fù)培養(yǎng)的成活率最高,為57.7%。
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本文建立了適合中國菊花種質(zhì)資源長期保存的玻璃化超低溫保存技術(shù)體系。在4℃下,把1~2mm的菊花莖尖放在含0.4mol/L蔗糖的MS培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)2~3d,用預(yù)處理液在25℃下處理30min,再用玻璃化試劑PVS2在冰浴條件下處理15min,換新鮮的PVS2試劑并迅速投入液氮。液氮保存24h后,40℃水浴解凍2min,用含蔗糖1.2mol/L的MS液體培養(yǎng)基洗滌20min,濾紙吸干后接種到恢復(fù)培養(yǎng)基中,在25℃條件下弱光培養(yǎng)1~3d轉(zhuǎn)入正常光照培養(yǎng)條件下培養(yǎng),2周后成活率可達(dá)86%以上,成活的莖尖均可再生。
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